Quantificação do DNA e genotipagem de biópsias de embriões bovinos Gir e Girolando produzidos in vitro / DNA quantification and genotyping of biopsies obtained from Gyr and Girolando in vitro produced bovine embryos

A biópsia embrionária associada à genotipagem permite a obtenção de informações genômicas antes mesmo da transferência dos embriões. Neste estudo, foram avaliadas amostras biopsiadas de blastocistos bovinos transferidos para receptoras (n=47), sob a hipótese de que a raça (Gir ou Girolando), o estádio embrionário (blastocisto ou blastocisto expandido) e a competência para estabelecimento de prenhez (positiva ou negativa) afetariam a quantidade e a qualidade do DNA da amostra obtida. O DNA foi extraído, amplificado, quantificado por eletroferograma e genotipado. O parâmetro call rate (CR) foi adotado para mensurar a qualidade da genotipagem. Obteve-se concentração de DNA de 86,07±171,66ng/µL e CR 0,73±0,17. O CR não variou em função da quantidade de DNA nas amostras. As variáveis raça e estádio embrionário não influenciaram a concentração de DNA, nem o CR. Houve efeito da prenhez sobre o CR (P=0,0187), mas, como houve maior CR nas amostras provenientes do grupo prenhez negativa, não foi possível associar esse parâmetro à qualidade embrionária. Concluiu-se que a raça e a qualidade embrionária não afetam os parâmetros aqui estudados em amostras embrionárias, ou seja, embriões com maiores chances de implantação não refletem alta qualidade nas amostras de biópsia genotipadas.(AU)

Embryo biopsy associated with genotyping allows genomic information before embryo transfer. In this study, blastocyst biopsy samples from embryos transferred to recipients (n= 47) were evaluated, under the hypothesis that breed (Gyr or Girolando), embryonic stage (blastocyst or expanded blastocyst) and competence to establish pregnancy (positive or negative) would affect the quantity and DNA quality of samples. DNA was extracted, amplified, quantified by electropherogram and genotyped. The parameter call rate (CR) was used to measure the quality of genotyping. DNA concentration of 86.07±171.66ng/µl, and CR 0.73±0.17 was obtained. CR did not vary according to the amount of DNA in the samples. The variables breed and embryonic stage had no influence on DNA concentration or CR. There was pregnancy effect on the CR (P= 0.0187), but since there was a higher CR in the samples from the negative pregnancy group, it was not possible to associate this parameter with the embryonic quality. We conclude that the breed and embryo quality do not affect the evaluated parameters in embryonic samples. Embryos with higher chances of implantation do not reflect high quality in embryo biopsy genotyped samples.(AU)

Modelos para avaliação genética da produção de leite no dia do controle nas três primeiras lactações / Models for genetic evaluation of milk yield on the day of control in the three first lactations

Objetivou-se verificar se a utilização do modelo autorregressivo (MAR) é adequada para obtenção de parâmetros genéticos para produção de leite no dia do controle (PLDC) de bovinos leiteiros da raça Gir. Foram analisados 125.191 registros de produções diárias, nas três primeiras lactações, por meio dos modelos de repetibilidade (MREP) e MAR. No MREP, foi considerado o efeito de ambiente de curto prazo; no MAR, foi considerado, também, o efeito de ambiente de longo prazo. Os modelos foram comparados por meio do logaritmo da função de máxima verossimilhança (−2logL) . A herdabilidade estimada pelo MREP foi 0,18; no caso do MAR, as estimativas para primeira, segunda e terceira lactações foram 0,32, 0,28 e 0,26, respectivamente. A estimativa de autocorrelação dos componentes de variância de longo prazo foi próxima de zero, e as de curto prazo foram de alta magnitude para primeira (0,79), segunda (0,79) e terceira (0,81) lactações. Logo, a influência do ambiente de curto prazo dentro de cada lactação não é a mesma. O valor de −2logL mais próximo de zero foi obtido para o MAR (-294.884,7778) em relação ao MREP (-329.266,4810). Assim, o MAR é adequado para obtenção de estimativas de parâmetros genéticos para PLDC nas três primeiras lactações de bovinos leiteiros.(AU)

Aimed to verify if the autoregressive model (MAR) is adequate to obtain genetic parameters for Gyr dairy cattle milk yield on the test day in the three first lactations. Analysis was performed on 125,191 records of daily production of 9,242 cows using repeatability model (MREP) and MAR. On MREP, a long-term environment was considered, on MAR, the short-term environment was also taken into consideration. The models were compared by logarithm of the maximum likelihood function (−2logL) . The heritability estimated using the MREP model was 0.18, while the heritability estimated by MAR for first, second, and third lactations were 0.32, 0.28 and 0.26, respectively. The autocorrelation estimates of the components of long-term variance were close to zero, and those of the short-term were of high magnitude for first (0.79), second (0.79) and third (0.81) lactations. Therefore, the influence of the short-term environment within each lactation is not the same. The value of −2logL closer to zero was obtained for MAR (-294,884.7778) in relation to MREP (-329,266.4810). Thus, MAR is suitable for obtaining genetic parameters estimates for PLDC in the first three lactations of dairy cattle.(AU)

Efeitos do diluidor na viabilidade espermática pós-criopreservação em tourinhos da raça Gir Leiteiro aos 25 meses de idade, pré-selecionados pela classificação andrológica por pontos / Effects of the extender in the semen post - thaw viability in young dairy Gyr bulls (Bos taurus indicus), pre - selected by breeding soundness evaluation

Procedeu-se à criopreservação do sêmen de oito tourinhos Gir Leiteiro, com idade média de 25 meses, pré-selecionados para elevada pontuação (média 84,4±5,6) na classificação andrológica por pontos (CAP), em dois diferentes diluidores: um à base de lactose-gema-glicerol e outro à base de lecitina de soja. As curvas de resfriamento e congelação foram padronizadas com o auxílio da máquina CRYOGEN®. Os parâmetros pós-congelação avaliados no sêmen submetido aos dois diluidores - motilidade, vigor, defeitos maiores, menores e totais, defeitos de acrossoma, cauda dobrada, reação ao teste hiposmótico (Thos) e células normais - foram comparados aos do sêmen fresco, exceto para Thos e entre eles. O sêmen de todos os animais foi congelado com êxito no diluidor lactose-gema-glicerol. Houve diferença (P<0,05) em todas as variáveis analisadas no sêmen fresco e pós-congelado, exceto para defeitos maiores. Entre diluidores, houve diferença (P<0,05) para motilidade, vigor, cauda dobrada e Thos. Estes resultados indicam que a seleção pelo CAP médio >80 é um bom índice para selecionar touros com maior taxa de espermatozoides viáveis pós-congelação.

Semen cryopreservation from eight young dairy Gyr bulls was performed using two different semen extenders. Bulls aging 25 months old and pre-selected for a high average score (84.4±5.6 in a 0-100 scale) in Zebu breeding soundness evaluation (BSE) composed the experimental group. Extenders were based on lactosis-egg yolk-glycerol and soya lecithin. Chilling and freezing curves were standardized by CRYOGEN® machine. Post-thaw features evaluated in semen frost in both extenders - motility, vigor, major, minor and total deffects, morphological alteration in acrossome, bent tail, reative cells to hyposmotic sweeling test (Thos), and normal cells - were compared to the ones in the fresh ejaculate (except Thos) and among them. It was possible to freeze semen from all animals in the lactosis-egg yolk-glycerol extender. There were difference (P<0.05) in all analyzed features between fresh and cryopreserved semen, except for major deffects. Between extenders, there were differences (P<0.05) in motility, vigor, bent tail, and Thos. All bulls had successfull semen freezability. These results sustain that pre-selection for high BSE values (average >80 points) is a good index to identify bulls with good post semen - thaw features. However, the choice of the extender is critical for obtaining acceptable results.

Mutation in gyrA and parC Genes of Ciprofloxacin-resistant Isolates of Acinetobacter baumannii / 中华医院感染学杂志

OBJECTIVE To study the correlation between mutations of gyrA and parC genes and ciprofloxacin-(resistant) clinical isolates of Acinetobacter baumannii from Chengdu.METHODS The genes of gyrA and parC DNA in 28 ciprofloxacin-resistant and 2 ciprofloxacin-susceptible isolates of A.baumannii were amplified by PCR and then analyzed by restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP) and DNA sequencing.(RESULTS) Hinf Ⅰ digestion of the gyrA gene products of susceptible isolates(generated) two fragments,but resistant isolates(generated) one fragment.The parC gene products generated 2 fragments.DNA sequencing of 5 resistant isolates revealed mutations in gyrA gene that resulted in amino acid substitutions: Ser83→Leu and Ala88→Thr,especially,Ser83 point mutation accounting for the disappearance of sequence of Hinf Ⅰ.There was not any mutation in(gyrA) of 1 susceptible isolate;the substitution of Ser108→Ile in parC(gene) of 1 susceptible and 1 resistant isolates were identified,the remaining four isolates had more nosense mutations.CONCLUSIONS Compared with parC gene mutations,(gyrA) gene mutations of A.baumannii appears to be the main molecular mechanism responsible for ciprofloxacin resistance.The high-level ciprofloxacin resistance in A.baumannii probably needs a variety of mutations.